Klargøring til aspiration og efterfølgende vitrifikation af oocytter med Irvine medie
Formål
At sikre at klargøring til vitrifikation af oocytter med Irvine medie, sker i overensstemmelse med Fertilitetsenheden, Aalborg Universitetshospitals politik, mål og kravgrundlag i øvrigt.
Beskrivelse
Baggrund, anvendelse og gyldighed
Proceduren omfatter klargøring til aspiration og denudering af oocytter der skal vitrificeres med Irvine medie.
Ansvar
Laboratorielederen har det overordnede ansvar for proceduren. I den daglige drift er laboratoriepersonalet ansvarlige for, at nye medarbejdere informeres og undervises i proceduren. Medarbejderen er herefter personlig ansvarlig for, at proceduren efterleves i praksis.
Fremgangsmetode
Klargøring af utensilier til aspiration:
• Det på forhånd udfyldte dyrkningsskema med tilhørende labels, markeres med en passende farve.
• Der skal klargøres én asp-bakke pr. 4 forventede oocytter.
• Labels med navn og cpr. nr. påklistres alle bakker på både bund og låg
• Asp-bakkerne nummereres fortløbende 1, 2, 3 osv. foroven på låget. Ud for hul nr. 1 (asp-hullet) noteres et A.
• Ved skyl påklistres et flushingbæger med tilsvarende label og dags dato. Et flushingbæger kan bruges til flere patienter.
• Der laves et centrifugeglas mærket med ”Follicle flush” pr. aspiration.
Klargøring af utensilier til denudering:
Klargøring af utensilier til vitrifikation:
Ophældning og afpipettering af reagenser til aspirationsbakker:
Udføres i sterilbænk
• Follicle flush sættes i varmeskab. Noter på flasken, hvornår den er sat i varmeskab, hvis der er anmodet om skyl på én eller flere patienter, kan det være nødvendigt med mere end én flaske. Det vurderes ud fra antal planlagte aspirationer.
• Centrifugeglassene til aspirationerne fyldes med Follicle flush medie.
• I asp-bakkerne afpipetteres 500 µl fertilitseringsmedie i hul 1,2 og 3, samt 2 ml i midten af bakken
• I hul 4 afpipetteres 500 µl cleavage medie.
• Alle huller overlejres med 500 µl olie
• Asp-bakker stilles i standard inkubator til ækvilibrering
• I varmeskabet lægges pr. aspiration poser med rundbundede reagensglas, svarende til forventedeantal follikler per patient
• Pr. aspiration med skyl, skal der 4 stk. sterile sprøjter (10 ml) i varmeskabet
• Kontroller at der står varmeblokke til alle aspirationer i varmeskabet. Desuden skal der være mindst én ekstra pose med rundbundede glas i varmeskabet.
Ophældning og afpippetering af medier til denuderingskåle:
Udføres i sterilbænk
• I denuderingsskålen afpipetters 3 dråber med 40 µl cumulase over stregen.
• Under stregen afpipetteres 8-12 dråber med ca. 25 µl fertiliseringsmedie
• Dråberne overlejres med ca. 6,5 ml olie
• Denuderingsskåle stilles i standard inkubator til ækvilibrering