Formål

At sikre at klargøring til vitrifikation af oocytter med Irvine medie, sker i overensstemmelse med Fertilitetsenheden, Aalborg Universitetshospitals politik, mål og kravgrundlag i øvrigt.

Beskrivelse

Baggrund, anvendelse og gyldighed

Proceduren omfatter klargøring til aspiration og denudering af oocytter der skal vitrificeres med Irvine medie.

Ansvar

Laboratorielederen har det overordnede ansvar for proceduren. I den daglige drift er laboratoriepersonalet ansvarlige for, at nye medarbejdere informeres og undervises i proceduren. Medarbejderen er herefter personlig ansvarlig for, at proceduren efterleves i praksis.

Fremgangsmetode

Klargøring af utensilier til aspiration:

• • Det på forhånd udfyldte dyrkningsskema med tilhørende labels, markeres med en passende farve.

• • Der skal klargøres én asp-bakke pr. 4 forventede oocytter.

• • Labels med navn og cpr. nr. påklistres alle bakker på både bund og låg

• • Asp-bakkerne nummereres fortløbende 1, 2, 3 osv. foroven på låget. Ud for hul nr. 1 (asp-hullet) noteres et A.

• • Ved skyl påklistres et flushingbæger med tilsvarende label og dags dato. Et flushingbæger kan bruges til flere patienter.

• • Der laves et centrifugeglas mærket med ”Follicle flush” pr. aspiration.

Klargøring af utensilier til denudering:

• • Én 6 cm petriskål pr. 4 oocytter

• • Skålene skal forsynes med patientlabel på både låg og bund. Patientlabel på låg skal sidde over midten.

Klargøring af utensilier til vitrifikation:

• • Der laves et centrifugeglas mærket med ”Gamete buffer”

Ophældning og afpipettering af reagenser til aspirationsbakker:

Udføres i sterilbænk

• • Follicle flush sættes i varmeskab. Noter på flasken, hvornår den er sat i varmeskab, hvis der er anmodet om skyl på én eller flere patienter, kan det være nødvendigt med mere end én flaske. Det vurderes ud fra antal planlagte aspirationer.

• • Centrifugeglassene til aspirationerne fyldes med Follicle flush medie.

• • I asp-bakkerne afpipetteres 500 µl fertilitseringsmedie i hul 1,2 og 3, samt 2 ml i midten af bakken

• • I hul 4 afpipetteres 500 µl cleavage medie.

• • Alle huller overlejres med 500 µl olie

• • Asp-bakker stilles i standard inkubator til ækvilibrering

• • I varmeskabet lægges pr. aspiration poser med rundbundede reagensglas, svarende til forventedeantal follikler per patient

• • Pr. aspiration med skyl, skal der 4 stk. sterile sprøjter (10 ml) i varmeskabet

• • Kontroller at der står varmeblokke til alle aspirationer i varmeskabet. Desuden skal der være mindst én ekstra pose med rundbundede glas i varmeskabet.

Ophældning og afpippetering af medier til denuderingskåle:

Udføres i sterilbænk

• • I denuderingsskålen afpipetters 3 dråber med 40 µl cumulase over stregen.

• • Under stregen afpipetteres 8-12 dråber med ca. 25 µl fertiliseringsmedie

• • Dråberne overlejres med ca. 6,5 ml olie

• • Denuderingsskåle stilles i standard inkubator til ækvilibrering